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一、液相色谱仪 |
1、高山压恒流泵 特点: 双泵头串联式 微机控制 通过键盘设定参数(时间、流量、压力、淋洗液比例)。 单相阀、活塞、阀座均为宝石耐磨损;密封圈为特种塑料耐高压。 10种工作程序 具有过压保护、断电保护及自诊断等功能。 可作单泵恒流输出或双泵梯度淋洗。 创新:为了消除压力波动,凸轮曲线以阿基米德螺旋线为基线再加以修正;采用混合式4相8拍步进电机,并由细分16步的驱动器驱动;增加机械微调和特制的缓冲器;实时微机控制,压力及时反馈,从而消除压力波动,攻克了长期阻挠我国液相色谱仪前进步伐的"输出压力高且稳定"的技术难关。 |
2、紫外分光检测器 |
特点: - 先进的光学系统 全息凹面光栅、光纤分光构成全新概念的双光束分光。 - 微机控制 键盘设定控制步进电机调动光栅选定波长(固定波长、局部扫描、全程自动扫描、单步和能量测试) 创新:紫外分光检测器是液相色谱仪关键之所在,而灵敏度是紫外分光检测器的关键之所在。为了降低噪音提高灵敏度,我们开发出独特的光路系统:采用全息凹面光栅,不用反射镜(反射一次损失20%光能),通过光纤分光去除杂散光简化了光路;利用微机进行基线跟踪和噪声处理。这样不仅减少了光能量传输损耗,保证最大光能量;而且大大提高了信噪比,保证了灵敏度高、稳定快。 |
3、色谱分离柱 |
色谱分离柱是液相色谱仪的关键部件,下面着重说明。 |
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3-1 柱的结构 1、堵棒(或导管)2、接头 3、接头 4、密封圈 5、螺帽 6、柱密封圈 7、柱管 8、柱填料 9 10、过滤片 |
3-2 柱的分类: 根据所有的担体材料分为三种: a.硅胶型:机械强度高,易制成小颗粒,理论塔板数高。 b.聚全物型:在广泛的PH值范围内稳定 c.羟基磷灰石型:对蛋白质等生物高分子样品有特殊的选择性。 根据分离方式分类: a.硅胶型 1) 正相:SIL--磷脂、NH--糖、维生素E,CN--甾类激素。 2) 反相:ODS(C18)、(C8 CN TMS Pheny1)低分子量化全物。 3) 离子交换: WAX(弱碱阴离子交换)--核苷酸、蛋白质 WCX(弱酸阳离子交换)--蛋白质 SAX(强碱阴离子交换)--核苷酸 SCX(强酸阳离子交换)--儿茶酚胶 4)凝胶过滤: Diol--蛋白质 GF--蛋白质 b.聚合物型: 1)反相:ODP--50--肽,蛋白质,低分化合物。 2)离子交换:ISC--氨基酸,胍类化合物,ISA--糖,IC--无机离子,PA--蛋白质,ES--蛋白质。 3)配位交换:SCR(磺化聚苯乙烯)--糖。 4)离子排阻:SCR-101H 102H--有机酸 5)凝胶过滤:ION--多糖 GS--水溶性分子 6)凝胶渗透色谱(GPC):GPD--合成分子、橡胶。 7)羟基磷灰石型:HPC--蛋白质、核苷酸 按尺寸分类: 1.制备:30mm 50mm 内径,半制备:20mm内径。 2.分析:标准型柱:4_8mm内径。 快速色谱柱:3mm内径、5cm长、4.6mm内径。 小孔径柱:2.5mm内径,微孔径柱1mm内径。 3-3柱的技术指标 *耐压:不小于40Mpa。 *渗透性:反相--流动相甲醇1ml/min,压力3Mpa。 正相--正乙烷1ml/min,压力3Mpa. *柱效:理论塔板极数>3x10<SUP>3</SUP>。 *对称柱:葸峰不对称因子AS在0.8~2.0范围内。 *外观:光洁、标牌、尺寸、填充剂、流动相方向、日期等。 ODS柱 ODS(C18)色谱柱是将十八烷基键合在担体的表面,然后填充的柱,在HPLC中应用广。在HPLC中反相色谱的引用占70%,其中极大部分 使用的是ODS(C18)。本公司所附的柱也是ODS(C18)柱,内径4.6mm,长度150mm。 一般反相色谱系统,流动相为极性溶剂,如水、甲醇、乙腈,非极性固定相,如十八烷基。反相系统简单,重复性好,柱子能长期稳 定工作,能完成分离、分析任务的60-80%,所以分析工作者使用得最多的是反相柱。 柱的使用和维护 由于柱的质量直接影响到样品组分得分离情况,组分的定性,定量分析,所以在操作时必须十分注意。 通常柱子损坏表现为:柱压升高,柱效下降,保留值改变,峰形崎变等。 以反相为列,它要求填料处于甲醇或乙腈中,不使柱子干枯,并注意下列事项: * 勿使柱子受较强振动 * 较长时间不用时,应在柱中充满甲醇,并把两头封死,尽量不使干枯。 * 当用水和甲醇(或乙腈)混合液体溶剂时,工作结束后必须用纯甲醇冲洗30分钟至1个小时,使柱子处于甲醇中,因水 易繁殖微生物, 使柱子堵塞,并降低柱效。 * 当使用KH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub>等缓冲液时,盐的浓度宜低,否则盐容易析出,柱效降低,柱压升高,使用后 必须用水冲洗( 绝不能用甲醇冲洗)使缓冲液全部溶于水排出,然后再用甲醇冲洗。 * 硅基固定相不宜在PH>8时使用,此时容易产生絮状物析出,堵塞柱子。 * 当流动相呈酸性时,使用后必须用水冲洗,因酸使柱效降低,后再用甲醇冲洗。 * 流动相最好经过过滤处理。 * 样品最好也经过过滤处理。 * 样品有时能复盖填料得活性点,使柱压升高,保留时间下降,防止方法是样品经过过滤。 * 样品组分的不可逆吸附,使柱压升高,柱效降低(通常易被吸附的有蛋白质、糖)防止方法是加保护柱和溶剂反冲, 最常用的是四氢呋喃。 * 当流动相从A换到B时,A、B不相溶,必须选择一能同A、B互溶剂C,先换成C再把C换成B,最常用的中间液是异丙醇。 * 由于长期使用,在较大的压力下,担体破裂而流失在柱前端形成一段空隙,使柱效下降,峰形畸变。维护方法:卸下 接头,用甲醇把填料调成糊状,填入柱内,同时将过滤片用超声波清洗机清洗一次。 | |
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